肝癌（HCC）是常见且致命的恶性肿瘤，多数患者确诊时已至晚期，现有靶向治疗药物存在耐药问题，亟需新的治疗靶点和策略。circRNAs 参与肿瘤发生发展，但其在肝癌中的作用机制尚未完全明确。

南京医科大学第一附属医院王学浩院士团队杨世坤等人在Advanced Science（IF:14.3）上发表了题为“EIF4A3-Mediated Biogenesis of CircFADS1 Promotes the Progression of Hepatocellular Carcinoma via Wnt/β-Catenin Pathway”的研究性论文。本研究揭示了circFADS1调控GSK3β的功能，从而影响肝细胞癌的进展。EIF4A3/circFADS1/GSK3β/β-catenin轴有望成为肝细胞癌的新治疗靶点，同时circFADS1也是仑伐替尼耐药的重要因素。拜谱生物为该研究成果提供了转录组学检测分析服务。

英文标题：EIF4A3-Mediated Biogenesis of CircFADS1 Promotes the Progression of Hepatocellular Carcinoma via Wnt/β-Catenin Pathway（Advanced Science IF:14.3）

中文标题：EIF4A3介导的CircFADS1生物发生通过Wnt/β-catenin途径促进肝细胞癌的进展

发表时间：2025年2月

客户单位：南京医科大学第一附属医院

研究材料：肝癌细胞

拜谱提供技术：转录组学

技术路线：

研究结果

01、肝癌中CircFADS1的识别与表征

50对HCC及其相邻非肿瘤组织临床数据表明CircFADS1在肿瘤中显著过表达(图1 A-D)，HepG2细胞表现出最高的CircFADS1表达水平（图1 E-H），主要定位于HCC细胞的细胞质中（图1 I-J）。

图1 CircFADS1的鉴定及特征

02、CircFADS1促进HCC细胞增殖，抑制体外凋亡

建立敲低细胞系以及过表达CircFADS1的稳定细胞系，CircFADS1敲低显著抑制了HCC细胞的增殖，表明CircFADS1增强了HCC细胞的增殖并抑制了其凋亡（图2A-G）。

图2 CircFADS1在HCC体外的作用

03、CircFADS1参与Wnt/β-Catenin通路

转录组测序等实验验证显示，CircFADS1 与 Wnt/β-Catenin 通路相关，可调节该通路关键蛋白 β-Catenin 和下游 c-MYC 的表达（图3A-C），进而影响肝癌细胞的增殖和凋亡，还可能调节抗肿瘤免疫反应。

图3 CircFADS1通过失活Wnt/β-catenin通路介导对HCC的致癌作用

04、HCC细胞中CircFADS1与GSK3β相互作用

利用RNA pull-down实验和质谱分析等方法鉴定CircFADS1相互作用蛋白(图4A-H)，结果表明CircFADS1 通过泛素化介导的降解来抑制肝癌细胞中 GSK3β 蛋白的水平。

图4 CircFADS1与GSK3β相互作用，促进其泛素化

05、GSK3β被RNF114泛素化并受到CircFADS1调控

免疫荧光显示，RNF114与GSK3β和CircFADS1共定位在细胞质中（图5A-B），CircFADS1 能与 GSK3β 结合，促进其泛素化和降解，且通过招募 E3 泛素连接酶 RNF114 增强这种作用，而 GSK3β 作为 CircFADS1 的下游效应器，参与调控肝癌细胞的生长和凋亡 。

图5 RNF114作为GSK3β的特异性E3泛素连接酶，而CircFADS1促进它们的相互作用

06、EIF4A3促进CircFADS1的生物合成的影响

作者证明EIF4A3与CircFADS1具有最多的结合位点（图6A），RIP证明EIF4A3可以结合到CircFADS1的下游位点，并且EIF4A3表达水平不受CircFADS1调控。WB结果显示EIF4A3过表达降低了GSK3β的表达并增加了β-catenin和c-MYC的水平（图6E），EIF4A3的过表达促进HepG2细胞的增殖并抑制了凋亡，这些效应可以通过CircFADS1的敲低来逆转。

图6 EIF4A3显著增强了CircFADS1的表达

07、CircFADS1促进HCC细胞在体内的生长

敲低CircFADS1的HepG2细胞形成的皮下肿瘤在大小或质量上均显著小于对照组（图7A），过表达CircFADS1的Hep3B细胞则表现出促进皮下肿瘤生长的明显效果。

图7 CircFADS1加速HCC细胞的体内生长

08、CircFADS1促进Lenvatinib的耐药性

CCK-8实验显示耐药细胞系的半抑制浓度显著高于亲本细胞系，CircFADS1在耐药细胞系中的表达显著更高（图8A-B）。CCK-8、克隆存活实验和流式细胞术显示CircFADS1的表达与Lenvatinib耐药相关(图8C)。体内实验也证明CircFADS1是促进HCC中lenvatinib耐药的关键因素。

图8 CircFADS1与lenvatinib耐药密切相关

文章小结

本研究旨在揭示新型环状 RNA（circRNA）CircFADS1影响肝细胞癌（HCC）进展的机制（图9）。CircFADS1在HCC中表达升高，并与不良预后相关。功能上，CircFADS1过表达通过诱导HCC细胞增殖和抑制细胞凋亡来加速HCC进展。机制上，RNA-seq分析表明其与Wnt/β-catenin通路有关。此外，CircFADS1与GSK3β相互作用，并通过招募泛素连接酶RNF114促进其泛素化和降解，而 EIF4A3则促进CircFADS1的生物合成。另外，CircFADS1 与仑伐替尼耐药性密切相关。

图9 肝癌细胞中 circFADS1 作用机制的示意图

拜谱小结

本研究揭示了CircFADS1调节GSK3β功能，影响肝细胞癌的进展，并证明EIF4A3/CircFADS1/GSK3β/β-catenin轴有望成为肝细胞癌的新型治疗靶点。拜谱生物为其提供了转录组学检测分析服务。拜谱生物建立了完善成熟的转录组学、蛋白组学、修饰蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务平台，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！

参考文献：

[1]Tang L, Ji Y, Ni C, et al. EIF4A3-Mediated Biogenesis of CircFADS1 Promotes the Progression of Hepatocellular Carcinoma via Wnt/β-Catenin Pathway. Adv Sci (Weinh). 2025;12(14):e2411869. doi:10.1002/advs.202411869